1. Características generales de la cadena productiva

Es importante destacar que a lo largo de la cadena de producción en una planta de incubación se llevan a cabo una serie de procesos (Fig. 1) que inician en dicha planta con el almacenamiento de los huevos en el cuarto frío a una temperatura entre 16 a 20 ⁰C por un periodo máximo de 7 días según la demanda de la industria avícola y de la planta de incubación. A continuación, se realiza la selección y clasificación de los huevos por tamaño, forma y limpieza. Posteriormente los huevos se cargan en las máquinas incubadoras encargadas de simular las condiciones ambientales en las que las gallinas incuban sus huevos naturalmente (Yerpes, 2020Yerpes R., M. (2020). Factores de riesgo asociados con la mortalidad de los pollos de engorde durante la primera semana de vida. Repositorio Universitat Autónoma de Barcelona. 1 (1), 137.).

Las incubadoras artificiales controlan los parámetros óptimos de temperatura (37 ⁰C), humedad (83.6 - 84 %) y volteo que permiten el desarrollo fisiológico de los embriones. Antes de iniciar el perfil de incubación se debe llevar a cabo un atemperado de máximo 12 horas a 24 -27 ⁰C para evitar un choque térmico y la condensación de los huevos (van der Pol et al., 2013van der Pol C. W., van Roovert-Reijirink, I. A. M., Maatjens, C. M., van den Brand, H. & Molenaar R. (2013). Effect of relative humidity during incubation at a set eggshell temperatura and brooding temperature posthatch on embryonic mortality and chick quality. Poultry Science, 92, 2145-2155.).

La temperatura puede tener un efecto divergente o bifásico durante el curso de la incubación. El aumento de la temperatura inicialmente acelera el crecimiento embrionario y la utilización de nutrientes y energía de la yema y la albúmina, pero a medida que avanza la incubación, la exposición a altas temperaturas constantes disminuye el crecimiento embrionario (Noiva et al., 2014Noiva, R., Menezes, A. & Peleteiro, M. (2014). Influence of temperature and humidity manipulation on chicken embryonic development. BMC Vet Res., 10 (234), 1-10. doi: 10.1186 / s12917-014-0234-3 ).

Es necesario disminuir el nivel de temperatura durante los últimos 2 a 3 días de incubación, es decir, que este indicador ambiental se ajusta según las etapas de incubación, ya que es un momento donde la tasa de calor metabólico del embrión es alta, lo que la disminución de la temperatura estimula el consumo de los nutrientes acelerando el metabolismo y el desarrollo en los embriones. Uno de los subproductos del metabolismo que ocurre durante la incubación es el agua y que el embrión debe eliminar el exceso de este nutriente para poder eclosionar (Wijnen et al., 2021Wijnen, H. J., van der Pol, C. W., van Roovert-Reijirink, I. A. M., De Smet, J., Lammers, A., Kemp, B. et al. (2021). Low incubation temperature during late incubation and early feeding affect broiler resilience to necrotic enteritis in later life. Front. Vet. Sci., 8, 1-16.).

Durante la incubación un huevo pierde peso debido a la evaporación de agua, esto es esencial para crear una suficiente cámara de aire que permita la ventilación pulmonar embrionaria después del picado interno y así lograr una exitosa eclosión. Una alta tasa de eclosión se alcanza cuando existe una pérdida de agua del 12 al 14 % del peso del huevo al momento de incubar hasta el momento de la transferencia (Barbosa et al., 2012Barbosa, V. M., Rocha, J.S.R., Pompeu M. A., Martins, N. R. S., Baiâ, N. C., Lara, L. J. C., Batista, J.V. M. S.P. & Leite, R.C. (2012). The effects of relative humidity and turning in incubators machines on the incubation yield and chick performance. World’s Poultry Science Journal, 69, 89-98. ISSN: 0043-9339 DOI: https://doi.org/10.1017/S0043933913000081.).

Las fluctuaciones de temperatura se deben evitar durante el transporte y almacenamiento de los huevos. La disminución de la temperatura debe ser gradual desde la granja de reproductores hasta el cuarto frío en la planta de incubación. Se debe manejar la transición en la temperatura de precalentamiento de los huevos (de 24 -27 ⁰C “75-80 °F”) desde el cuarto frío hasta la incubadora para evitar un choque térmico del embrión y una condensación en la cáscara. De esta manera, todos los huevos lograrán alcanzar la temperatura deseada uniforme (van der Pol et al., 2013van der Pol C. W., van Roovert-Reijirink, I. A. M., Maatjens, C. M., van den Brand, H. & Molenaar R. (2013). Effect of relative humidity during incubation at a set eggshell temperatura and brooding temperature posthatch on embryonic mortality and chick quality. Poultry Science, 92, 2145-2155.). Un precalentamiento desuniforme aumenta la variación del tiempo de los nacimientos (Llamuca et al., 2024Llamuca, L., Llamuca, M. & Intriago, V. (2024). Efecto de la edad de gallinas reproductoras en la incubabilidad y calidad del pollito bb: Una revisión. Revista Científica Arbitrada en Investigaciones de la Salud. ‘‘GESTAR”, 7 (14), 184-204. ).

Schmidt (2003) señala que existen dos términos importantes a tener en cuenta en el proceso de la incubación y que determinan el éxito de la misma: incubabilidad y desarrollo embrionario. La incubabilidad en el escenario comercial, es el porciento de pollitos viables de primera calidad que son aptos para la crianza. Se calcula realizando una división entre el total de pollitos viables y total de huevos cargados en la incubadora. Este porciento de incubabilidad está influenciado por factores como la responsabilidad de las granjas de reproductores desde la ovoposición hasta la eclosión en las plantas de incubación.

Otro elemento clave a tener presente, según Sandoval et al. (2005)Sandoval, A., Yuño, M., Bakker, M. L., Rodríguez, E. & Beretta A. (2005). Aplicación de la embriodiagnosis para evaluar la eficiencia de la planta de incubación de parrilleros en una empresa avícola comercial en la Argentina. RIA, 34 (2), 75-89. es el desempeño de los polluelos durante la primera semana en la granja de reemplazo especialmente los niveles de mortalidad y los pesos corporales. Aunque el rendimiento de los pollitos puede estar dado por el manejo en la granja y el impacto inicial de los procedimientos en la planta de incubación a menudo se subestima y también debe considerarse cuando surgen problemas.

Kuurman et al. (2003)Kuurman, W. W., Bailey, B.A., Koops, W. J. and Grossman, M. (2003). A model for failure of a chicken embryo to survive incubation. Poultry Science, 82 (2), 214-222. destacan que, en el caso del desarrollo embrionario, se practica la embriogénesis de aves en un ambiente relativamente protegido. Este entorno puede manipularse bien en aves domésticas como Gallus gallus (pollitos) donde la incubación ha sido durante mucho tiempo un proceso comercial. El proceso de desarrollo embrionario comienza en el oviducto y alcanza la etapa de desarrollo blastodérmico y / o gastrulación en la oviposición.

Los embriones de aves pueden verse afectados por los "efectos maternos" y por las condiciones ambientales durante los períodos de preincubación e incubación. En general, los efectos maternos sobre la progenie incluyen un componente tanto genético como ambiental representado por la deposición de hormonas de la yema y la utilización de nutrientes embrionarios. Estos efectos tienen un impacto significativo en el desarrollo de una amplia gama de rasgos de progenie (Reijirink et al., 2008Reijirink, I. A. M., Meijerhof, R., Kemp, B., Van Den Brand, H., Arora, K. L., Kosin, I. L. et al. (2008). The chicken embryo and its micro environment during egg storage and early incubation. Worlds Poult Sci. J., 64 (04), 581-598.).

La manipulación de la temperatura ambiental durante el período de almacenamiento del huevo, el precalentamiento y la incubación per se afecta significativamente el desarrollo del embrión, el progreso de la eclosión, la calidad del pollito en la eclosión y el desarrollo del pollito post-eclosión. Además, afectan la adquisición de termotolerancia al posterior desafío térmico post-eclosión (Tona et al., 2007Tona, K., Onagbesan O., Bruggeman, V., De Smit, L., Figueiredo, D. & Decuypere, E. (2007). E.Non-ventilation during early incubation in combination with dexamethasone administration during late incubation: 1. Effects on physiological hormone levels, incubation duration and hatching events. Domestic Animal Endocrinology, 33 (1), 32-46.; Tona et al., 2022Tona, K., Voemesse, K., N’nanlé, O., Oke, O. E., Kouame, Y. A. E., Bilalissi, A. et al. (2022). Chicken Incubation Conditions: Role in Embryo Development, Physiology and Adaptation to the Post-Hatch Environment. Front. Physiol., 13, 895854.).

2. Causas de desvío de los valores normales de la incubación

Entre las causas de desvío de los valores normales de la incubación, se destacan, los huevos infértiles, los huevos cascados, la gravedad específica, huevos contaminados, la mortalidad embrionaria en las Fase I, II y III, los picados no nacidos y las malformaciones (Plano y Matteo, 2001).

3. Patología de la incubación (perinatal)

La patología perinatal se conoce como pollitos de descarte o de segunda que conllevan a la falta de productividad de una planta de incubación. Incluye no solo a los pollitos que no lograron eclosionar, sino también a aquellos que nacen pero que no son viables en el sistema de producción. A continuación, se relacionan las patologías:

Tanto el volteo como la ventilación inadecuada tienen un papel importante en estas patologías (Intriago et al., 2023Intriago, M. V. A., Cedeño, R. O. A., Hurtado, E. A. & Rivera, F. R. D. (2023). Manejo en edad de reproductoras y temperatura de incubación sobre ventana de nacimiento y calidad del pollito BB. Ciencia UNEMI, 16 (43), 24-34.).

La temperatura en el proceso de incubación debe ser tenida en cuenta, puesto que más allá del cero fisiológico de los distintos tejidos hay una secuencia en relación con el momento en que se produjo la falla térmica de la incubadora con respecto a la aparición de malformaciones (Plano y Matteo, 2001).

Pollitos despatarrados: Se debe principalmente al piso resbaladizo de las bandejas de las nacedoras y puede ser causado por baja humedad o por deficiencias nutricionales.

Pollitos con signos nerviosos: Es de etiología variada, puede ser originado tanto por causas genéticas como por causas nutricionales y ambientales (temperatura alta o humedad baja en la incubación). Si el porcentaje de pollitos con signos nerviosos es muy alto se puede corregir aumentando la humedad en la incubación, pero esto siempre es bueno comprobando la merma de peso de los huevos en ese período tal como se explica en el acápite 5. Ciertas enfermedades pueden causar signos nerviosos en los pollitos (ej. aspergilosis cerebral y encefalomielitis, comunes en la primera semana de vida del pollito en la granja de engorde).

Pollitos con hernia cerebral (encefalocele): Pueden existir distintas causas, pero mayormente se le relaciona con temperatura alta durante el período de incubación y en algunos casos por volteo incorrecto.

Pollitos que no se pueden parar: Por ventilación inadecuada, sobrecalentamiento, en algún momento de los 21 de incubación y alta humedad durante los primeros 19 días.

Pollitos deshidratados: Huevos cargados muy temprano. Baja humedad entre los 20 y 21 días de incubación. Pollitos que han permanecido en la nacedora por mucho tiempo. Un signo característico de un pollito deshidratado es la sequedad de la piel de la pata y la visualización de la vena. También la gota o síndrome úrico que más bien es una patología de la primera semana del pollito relacionada con la deshidratación severa por baja humedad o alta temperatura en la nacedora, la sala de pollitos, por una permanencia excesiva en las nacedoras o en la planta. El ácido úrico precipita en forma de uratos tanto en las articulaciones causando la denominada gota articular como en los órganos internos (gota visceral).

Pollitos muy pequeños: Huevos cargados de poco peso y tamaño. Baja humedad de almacenamiento e incubación. Alta temperatura de incubación.

Pollitos muy grandes con el abdomen abultado y blando (fofos): Bajo promedio de temperatura. Mala ventilación de la nacedora o incubadora. Alta humedad sobre todo en el período de la incubadora.

Pollitos débiles: Alta temperatura en la nacedora. Mala ventilación. Fumigación excesiva con formalina en la incubadora. Mal estado nutricional o sanitario de los reproductores.

Pollitos con plumón corto seco y ojos pegados: Temperatura alta, humedad baja, exceso de ventilación en la nacedora.

Pollitos con la parte superior del pico sangrando y tarsos rojos: Es cuando la pérdida de humedad del huevo durante la incubación ha sido baja y el pollito tiene que picar más arriba (la cámara de aire es más pequeña de lo normal) y la falta de absorción del saco vitelino aumenta el esfuerzo realizado.

Nacimientos prematuros: Debido a alta temperatura durante el almacenamiento de los huevos. Precalentamiento incorrecto. Alta temperatura de incubación o baja humedad en el nacimiento.

Nacimientos atrasados: Baja temperatura durante la incubación. Falta de precalentamiento. Almacenamiento de los huevos por tiempo prolongado y a bajas temperaturas. Huevos demasiado grandes.

Cascarones de huevo manchados con sangre en su interior: los pollitos salieron del huevo antes que sus ombligos cicatricen debido al trabajo de las nacedoras con alta temperatura.

Aspergilosis: Es una enfermedad del pollito recién nacido causada por Aspergillus fumigatus. La contaminación puede provenir del huevo, de todos los lugares con los que tuvo contacto y de la planta de incubación. La aspergilosis puede presentarse de diferentes formas:

Pollitos con pericarditis, coagulación del vitelo y congestión hepática: Se trata de una infección bacteriana. Conviene hacer un diagnóstico de laboratorio para la identificación de enterobacterias (Salmonella spp., E. coli) (Spackman y Stephens, 2016Spackman, E. & Stephens, C. (2016). Virus isolation and propagation in embryonating eggs. In: Eilliams SM, ed. A Laboratory Manual for the Isolation, Identification and Characterization of Avian Pathogens. 6th ed. American Association of Avian Pathologist. 361-367.)

1. General characteristics of the production chain

It is important to highlight that throughout the production chain in a hatchery, a series of processes are carried out (Fig. 1) that begin in said plant with the storage of the eggs in the cold room at a temperature between 16 to 20 ⁰C for a maximum period of 7 days according to the demand of the poultry industry and the hatchery. Next, the eggs are selected and classified by size, shape and cleanliness. Subsequently, the eggs are loaded into the incubator machines in charge of simulating the environmental conditions in which hens incubate their eggs naturally (Yerpes, 2020Yerpes R., M. (2020). Factores de riesgo asociados con la mortalidad de los pollos de engorde durante la primera semana de vida. Repositorio Universitat Autónoma de Barcelona. 1 (1), 137.).

Artificial incubators control the optimal parameters of temperature (37 0C), humidity (83.6 - 84 %) and turning that allow the physiological development of the embryos. Before starting the incubation profile, a maximum tempering of 12 hours at 24 -27 0C must be carried out to avoid thermal shock and condensation of the eggs (van der Pol et al., 2013van der Pol C. W., van Roovert-Reijirink, I. A. M., Maatjens, C. M., van den Brand, H. & Molenaar R. (2013). Effect of relative humidity during incubation at a set eggshell temperatura and brooding temperature posthatch on embryonic mortality and chick quality. Poultry Science, 92, 2145-2155.).

Temperature can have a divergent or biphasic effect during the course of incubation. Increasing temperature initially accelerates embryonic growth and nutrient and energy utilization from yolk and albumen, but as incubation progresses, exposure to constant high temperatures decreases embryonic growth (Noiva et al., 2014Noiva, R., Menezes, A. & Peleteiro, M. (2014). Influence of temperature and humidity manipulation on chicken embryonic development. BMC Vet Res., 10 (234), 1-10. doi: 10.1186 / s12917-014-0234-3 ).

It is necessary to lower the temperature level during the last 2 to 3 days of incubation, that is, this environmental indicator is adjusted according to the stages of incubation, since it is a time when the metabolic heat rate of the embryo is high, which is why the decrease in temperature stimulates the consumption of nutrients, accelerating metabolism and development in the embryos. One of the byproducts of the metabolism that occurs during incubation is water and the embryo must eliminate the excess of this nutrient in order to hatch (Wijnen et al., 2021Wijnen, H. J., van der Pol, C. W., van Roovert-Reijirink, I. A. M., De Smet, J., Lammers, A., Kemp, B. et al. (2021). Low incubation temperature during late incubation and early feeding affect broiler resilience to necrotic enteritis in later life. Front. Vet. Sci., 8, 1-16.).

During incubation, an egg loses weight due to water evaporation. This is essential to create a sufficient air chamber to allow embryonic lung ventilation after internal puncture and thus achieve successful hatching. A high hatching rate is achieved when there is a water loss of 12 to 14% of the egg weight at the time of incubation until the time of transfer (Barbosa et al., 2012Barbosa, V. M., Rocha, J.S.R., Pompeu M. A., Martins, N. R. S., Baiâ, N. C., Lara, L. J. C., Batista, J.V. M. S.P. & Leite, R.C. (2012). The effects of relative humidity and turning in incubators machines on the incubation yield and chick performance. World’s Poultry Science Journal, 69, 89-98. ISSN: 0043-9339 DOI: https://doi.org/10.1017/S0043933913000081.).

Temperature fluctuations should be avoided during egg transport and storage. Temperature decrease should be gradual from the breeder farm to the cold room in the hatchery. The transition in egg preheating temperature (24 -27 °C “75-80 °F”) from the cold room to the incubator should be managed to avoid thermal shock of the embryo and condensation on the shell. In this way, all eggs will achieve the desired uniform temperature (van der Pol et al., 2013van der Pol C. W., van Roovert-Reijirink, I. A. M., Maatjens, C. M., van den Brand, H. & Molenaar R. (2013). Effect of relative humidity during incubation at a set eggshell temperatura and brooding temperature posthatch on embryonic mortality and chick quality. Poultry Science, 92, 2145-2155.). Uneven preheating increases the variation in hatching time (Llamuca et al., 2024Llamuca, L., Llamuca, M. & Intriago, V. (2024). Efecto de la edad de gallinas reproductoras en la incubabilidad y calidad del pollito bb: Una revisión. Revista Científica Arbitrada en Investigaciones de la Salud. ‘‘GESTAR”, 7 (14), 184-204. ).

Schmidt (2003) points out that there are two important terms to consider in the incubation process that determine the success of the same: hatchability and embryonic development. In the commercial scenario, hatchability is the percentage of viable chicks of first quality that are suitable for breeding. It is calculated by dividing the total number of viable chicks by the total number of eggs loaded in the incubator. This percentage of hatchability is influenced by factors such as the responsibility of the breeder farms from oviposition to hatching in the incubators.

Another key element to consider, according to Sandoval et al. (2005)Sandoval, A., Yuño, M., Bakker, M. L., Rodríguez, E. & Beretta A. (2005). Aplicación de la embriodiagnosis para evaluar la eficiencia de la planta de incubación de parrilleros en una empresa avícola comercial en la Argentina. RIA, 34 (2), 75-89. is the performance of the chicks during the first week on the replacement farm, especially mortality levels and body weights. Although chick performance can be influenced by on-farm management and the initial impact of hatchery procedures is often underestimated and should also be considered when problems arise.

Kuurman et al. (2003)Kuurman, W. W., Bailey, B.A., Koops, W. J. and Grossman, M. (2003). A model for failure of a chicken embryo to survive incubation. Poultry Science, 82 (2), 214-222. highlight that in the case of embryonic development, avian embryogenesis is practiced in a relatively protected environment. This environment can be well manipulated in domestic birds such as Gallus gallus (chicks) where incubation has long been a commercial process. The embryonic development process begins in the oviduct and reaches the blastodermal and/or gastrulation stage of development at oviposition.

Avian embryos can be affected by “maternal effects” and by environmental conditions during the preincubation and incubation periods. In general, maternal effects on offspring include both a genetic and environmental component represented by yolk hormone deposition and embryonic nutrient utilization. These effects have a significant impact on the development of a wide range of offspring traits (Reijirink et al., 2008Reijirink, I. A. M., Meijerhof, R., Kemp, B., Van Den Brand, H., Arora, K. L., Kosin, I. L. et al. (2008). The chicken embryo and its micro environment during egg storage and early incubation. Worlds Poult Sci. J., 64 (04), 581-598.).

Manipulation of ambient temperature during the egg storage period, pre-warming and incubation per se significantly affects embryo development, hatching progress, chick quality at hatching and post-hatch chick development. Furthermore, they affect the acquisition of thermotolerance to the subsequent post-hatch thermal challenge (Tona et al., 2007Tona, K., Onagbesan O., Bruggeman, V., De Smit, L., Figueiredo, D. & Decuypere, E. (2007). E.Non-ventilation during early incubation in combination with dexamethasone administration during late incubation: 1. Effects on physiological hormone levels, incubation duration and hatching events. Domestic Animal Endocrinology, 33 (1), 32-46.; Tona et al., 2022Tona, K., Voemesse, K., N’nanlé, O., Oke, O. E., Kouame, Y. A. E., Bilalissi, A. et al. (2022). Chicken Incubation Conditions: Role in Embryo Development, Physiology and Adaptation to the Post-Hatch Environment. Front. Physiol., 13, 895854.).

2. Causes of deviation from normal incubation values

Among the causes of deviation from normal incubation values, infertile eggs stand out, broken eggs, specific gravity, contaminated eggs, embryonic mortality in Phase I, II and III, unborn eggs and malformations (Plano and Matteo, 2001).

3. Incubation pathology (perinatal)

Perinatal pathology is known as discarded or second-rate chicks that lead to a lack of productivity in a hatchery. It includes not only chicks that failed to hatch, but also those that are born but are not viable in the production system. The pathologies are listed below:

Both turning and inadequate ventilation play an important role in these pathologies (Intriago et al., 2023Intriago, M. V. A., Cedeño, R. O. A., Hurtado, E. A. & Rivera, F. R. D. (2023). Manejo en edad de reproductoras y temperatura de incubación sobre ventana de nacimiento y calidad del pollito BB. Ciencia UNEMI, 16 (43), 24-34.).

The temperature in the incubation process must be taken into account, since beyond the physiological zero of the different tissues there is a sequence in relation to the moment in which the thermal failure of the incubator occurred with respect to the appearance of malformations (Plano and Matteo, 2001).

Sprawled out chicks: It is mainly due to the slippery floor of the hatcher trays and can be caused by low humidity or nutritional deficiencies.

Chicks with nervous signs: It has varied etiology and can be caused by genetic, nutritional and environmental causes (high temperature or low humidity during incubation). If the percentage of chicks with nervous signs is very high, it can be corrected by increasing the humidity during incubation, but it is always a good idea to check the weight loss of the eggs during this period, as explained in section 5. Certain diseases can cause nervous signs in chicks (e.g. cerebral aspergillosis and encephalomyelitis, common in the first week of the chick's life on the fattening farm).

Chicks with cerebral hernia (encephalocele): There may be different causes, but it is mostly related to high temperature during the incubation period and in some cases to incorrect turning.

Chicks that can't stand up: Due to inadequate ventilation, overheating at some point during the 21 days of incubation and high humidity during the first 19 days.

Dehydrated chicks: Eggs loaded too early. Low humidity between 20 and 21 days of incubation. Chicks that have remained in the hatcher for too long. A characteristic sign of a dehydrated chick is dry skin on the leg and visible veins. Also gout or uric acid syndrome, which is rather a pathology of the chick's first week related to severe dehydration due to low humidity or high temperature in the hatcher, the chick room, due to excessive stay in the hatchers or in the plant. Uric acid precipitates in the form of urates both in the joints causing the so-called joint gout and in the internal organs (visceral gout).

Very small chicks: Light and small eggs. Low storage and incubation humidity. High incubation temperature.

Very large chicks with a swollen and soft abdomen (flabby): Low average temperature. Poor ventilation of the hatchery or incubator. High humidity, especially during the incubator period.

Weak chicks: High temperature in the hatchery. Poor ventilation. Excessive fumigation with formalin in the incubator. Poor nutritional or health status of the breeders.

Chicks with short, dry down and stuck-together eyes: High temperature, low humidity, excessive ventilation in the hatchery.

Chicks with bleeding top of beak and red tarsi: This is when the moisture loss of the egg during incubation has been low and the chick has to peck higher up (the air chamber is smaller than normal) and the lack of absorption of the yolk sac increases the effort required.

Premature births: Due to high temperature during egg storage. Incorrect preheating. High incubation temperature or low humidity at hatching.

Late births: Low temperature during incubation. Lack of preheating. Eggs stored for long periods at low temperatures. Eggs that are too large.

Eggshells stained with blood inside: The chicks hatched before their navels had healed due to the high temperature work of the hatchers.

Aspergillosis: It is a disease of the newborn chick caused by Aspergillus fumigatus. Contamination can come from the egg, from all the places with which it has come into contact and from the incubation plant. Aspergillosis can occur in different forms:

Chicks with pericarditis, yolk coagulation and liver congestion: This is a bacterial infection. A laboratory diagnosis is recommended to identify enterobacteria (Salmonella spp., E. coli) (Spackman and Stephens, 2016Spackman, E. & Stephens, C. (2016). Virus isolation and propagation in embryonating eggs. In: Eilliams SM, ed. A Laboratory Manual for the Isolation, Identification and Characterization of Avian Pathogens. 6th ed. American Association of Avian Pathologist. 361-367.).